昆虫蛋白研究在当今社会是比较普遍的。 相比于大肠杆菌,昆虫细胞能完成更复杂的蛋白翻译后修饰,表达出更接近天然构象的功能性蛋白。
但是蛋白表达过程是复杂的,每一步都至关重要,尤其在蛋白提取实验上,选对方法很重要。
1.样品准备:收获经离心浓缩的昆虫细胞沉淀,用预冷的裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂)量悬,制成均匀的细胞悬液。
2.仪器准备与参数设置:将净信高压均质机连接已经预冷的冷水机(需要提前半小时预冷)以维持低温环境。将细胞悬液加入料杯。设定破碎压力(例如400 bar)和循环次数(通常1-3次)。
4.后处理与分析:通过SDS-PAGE、Western Blot、ELISA或活性测定等方法,对目标蛋白生物活性进行综合分析。
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